上海恒遠(yuǎn)與您嘮嘮關(guān)于抗體特異性的選擇

   陽春三月，上海恒遠(yuǎn)與您嘮嘮關(guān)于抗體特異性的選擇。特異性的選擇主要需要考慮四個方面：蛋白特異性、種屬特異性、實驗方法特異性、標(biāo)記物的特異性。
1、蛋白特異性：
   針對需要檢測的蛋白查找抗體，幾個細(xì)節(jié)要區(qū)分，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測，對抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說明書的檢測說明。如果重組蛋白不 是全長表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對，并結(jié)合抗體免 疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測需要確定具體位點，不同位點的磷酸化意味著可能有不同的機制存在，不宜一概而論。
2、種屬特異性：
   同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源情況與其他種屬發(fā)生交叉 反應(yīng)。需要參照說明書注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫的抗體，不過一般這種情況生產(chǎn)商不會受 理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請到免費的抗體樣品，則利于抗體選擇。 
3、實驗方法特異性：
   目前使用抗體的實驗方法有很多，不同的使用方法過程中，因為對蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對抗體的識別表位和效價要求都是不一樣的。具體 的根據(jù)說明書注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會將每個抗體都進(jìn)行各種實驗的檢測，目前檢測比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對具體 的實驗方法沒有找到合適的抗體的，可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。同樣，申請到免費的抗體樣品是個很好的途徑。
4、標(biāo)記物的特異性：
   一般基于實驗操作的實驗方法不會使用帶有標(biāo)記的一抗，比如WB、IHC等，都是通過二抗類的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。
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