赭曲霉素（Ochratoxin）試劑盒使用說明書

使用目的：
本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中赭曲霉素（Ochratoxin）殘留的定量檢測。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用直接競爭ELISA方法，在微孔板包被有赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯(lián)抗原，加入赭曲霉素（Ochratoxin）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離赭曲霉素（Ochratoxin）與微孔條上預(yù)包被的赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯(lián)抗原互相競爭抗赭曲霉素（Ochratoxin）抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中赭曲霉素（Ochratoxin）含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中赭曲霉素（Ochratoxin）的含量。
試劑盒組成
1 預(yù)包被的赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。
2 赭曲霉素（Ochratoxin）標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是：0μg/ml，0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.04μg/ml,0.08μg/ml,0.16μg/ml
3抗赭曲霉素（Ochratoxin）抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。
4顯色液A：1瓶（6ml）。
5顯色液B：1瓶（6ml）。
6終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
7樣本稀釋液：1瓶（10×,  6ml），用于樣品稀釋用。
8濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
貯存
1 試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
注意事項(xiàng)
1 使用試劑盒前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書。
2 不要使用過期試劑盒。
3 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時(shí)。
4 標(biāo)準(zhǔn)品中含有黃曲霉素，使用時(shí)應(yīng)特別注意，操作時(shí)應(yīng)帶手套。
5 終止液中含有硫酸，使用時(shí)防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6 不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用，否則會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果。
7 不同批號(hào)試劑盒中的試劑不得混用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不得混用，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
8 稀釋樣本時(shí)必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果
9 混合試劑時(shí)應(yīng)避免起泡。
樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴(yán)格按說明書操作，提取過程中應(yīng)準(zhǔn)確稀釋，否則會(huì)出現(xiàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，樣品應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
2強(qiáng)力振蕩3分鐘
3用Whatman 濾紙過濾
4取25µl處理后的樣品，加入25µl樣本稀釋液于反應(yīng)孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）
酶免分析步驟
1 實(shí)驗(yàn)須知
2實(shí)驗(yàn)開始前請(qǐng)將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時(shí)間約2小時(shí)。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準(zhǔn)確度。
3使用后請(qǐng)立即將試劑放回2~8℃保存
4請(qǐng)不要改變分析程序
5請(qǐng)使用的微量移液器
6操作一旦開始，請(qǐng)不要中斷任何程序
7ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請(qǐng)嚴(yán)格按照要求操作
8為避免交叉污染，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
9 加樣時(shí)請(qǐng)勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
10分析步驟
11預(yù)先進(jìn)行編號(hào)，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測
12取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
13樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
14在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
15在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
16在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
17在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結(jié)合物
18輕輕晃動(dòng)反應(yīng)板幾秒鐘。
1937℃溫浴30min （溫浴過程中不時(shí)輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）
20甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以*除去孔中液體。
21反應(yīng)
22洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個(gè)微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動(dòng)反應(yīng)板使之*混勻
23 37℃溫浴10min
24 每孔中加入50µl終止液，混勻
25 在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。

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