復(fù)方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復(fù)模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響
竇群立1，袁韓濤2，黃雅松2，申海濱2
（1．陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，陜西 咸陽 712000；2．陜西中醫(yī)藥大學(xué)，陜西 咸陽 712000）

【摘要】目的 探討復(fù)方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復(fù)模型大鼠EGF、VEGF、TGF-β的影響。方法 選取SPF級成熟年齡SD大鼠75只，隨機(jī)分成五組，各15只：生理鹽水組、復(fù)方苦參黃柏溶液組、氧療組、復(fù)方苦參黃柏溶液+氧療組、康復(fù)新液組。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行造模，并于造模成功之后的第2天開始給藥，在造模后的第3天、第7天、第10天、第14天觀察創(chuàng)面組織學(xué)的改變。在第3天、第7天、第14天對創(chuàng)面進(jìn)行標(biāo)本采集，用ELISA檢測標(biāo)本中EGF、VEGF、TGF-β的含量。結(jié)果 創(chuàng)面組織學(xué)生長情況：在檢測的同一時期，復(fù)方苦參黃柏溶液+氧療組成纖維細(xì)胞數(shù)量，新生毛細(xì)血管，膠原纖維等生長明顯強(qiáng)于其余四組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。生理鹽水組差，其余三組介于三者之間且差異不大。標(biāo)本中EGF、VEGF、TGF-β含量檢測情況：在檢測的同一時段，復(fù)方苦參黃柏溶液+氧療組EGF、VEGF、TGF-β含量明顯高于其余四組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），生理鹽水組EGF、VEGF、TGF-β含量低，其余三組EGF、VEGF、TGF-β含量介于三者之間且差異不大。結(jié)論 復(fù)方苦參黃柏溶液經(jīng)氧驅(qū)動霧化對急性創(chuàng)傷修復(fù)模型大鼠的創(chuàng)面修復(fù)有促進(jìn)作用、亦可提高組織中EGF、VEGF、TGF-β的含量，且三者對創(chuàng)面的修復(fù)可能具有相關(guān)性。

【關(guān)鍵詞】復(fù)方苦參黃柏溶液；氧驅(qū)動霧化；創(chuàng)傷修復(fù)；EGF；VEGF；TGF-β

【中圖分類號】R856.2

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B

【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.12.192.03
當(dāng)前經(jīng)濟(jì)化的高速的發(fā)展，創(chuàng)傷的發(fā)病情況成為心臟病、腦血管病、腫瘤疾病之后，導(dǎo)致人類傷殘甚至死亡第四個原因[1]。本實驗從傳統(tǒng)中藥聯(lián)合局部氧療治療創(chuàng)傷修復(fù)的思路出發(fā)，結(jié)合傳統(tǒng)中藥與氧療的方法，創(chuàng)新氧驅(qū)動中藥霧化局部外治的新型治療方法，實驗研究復(fù)方苦參黃柏溶液氧驅(qū)動霧化外治對創(chuàng)傷修復(fù)模型大鼠的治療作用，并對其作用機(jī)理進(jìn)行初步探討，以期為治療創(chuàng)傷皮膚修復(fù)提供新方法，并為新治療方法提供實驗依據(jù)。現(xiàn)將實驗方法及結(jié)果報道如下。
1 材料與方法
1.1 動物
清潔級SD大鼠75只，雄性，體重大約在200～250 g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK（軍）2012-0007），在實驗動物中心適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。
1.2 藥物與試劑
復(fù)方苦參黃柏溶液的組成有：苦參30 g、黃柏20 g、蒼術(shù)15 g、艾葉10 g、重樓25 g、花椒12 g。由陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中藥房提供，飲片經(jīng)提純加工成每10 mL相當(dāng)于原藥材3.5 g的溶液，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑中心提制備。康復(fù)新液由四川好醫(yī)生攀西藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。TGF-β、VEGF、EGF試劑盒由上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司提供。
1.3 主要儀器
離心機(jī)，KDC-40（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；酶標(biāo)儀，RT-6000（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）；自動組織包埋機(jī)，STD-30（德國萊卡公司）；組織切片機(jī)，KHF-524（德國萊卡公司）等。
1.4 方法
1.4.1 造模
造模前大鼠背部脫毛、稱重，腹腔注射10%戊巴bi妥鈉3.5 ml/kg麻醉后，消毒鋪巾，在脊旁0.5 cm兩側(cè)，各作一個1.6*1.6 cm2矩形標(biāo)記，切除全層皮膚，止血后用無菌紗布包扎，常規(guī)飼養(yǎng)。
1.4.2 分組及換藥
造模完成后，利用隨機(jī)法分組。造模成功后第2天，按文獻(xiàn)方法折算大鼠用藥量 [2]。模型組：15只，每天用生理鹽水濕敷創(chuàng)面20 min。中藥組：15只，每天用復(fù)方苦參黃柏溶液濕敷創(chuàng)面20 min。氧療組：15只，每天局部氧療20分鐘。
4.康復(fù)新液組：15只，每天用康復(fù)新液濕敷創(chuàng)面20 min。中藥氧療組：15只，每天用氧驅(qū)復(fù)方苦參黃柏溶液霧化創(chuàng)面20 min。霧化步驟：10 ml復(fù)方苦參黃柏溶液加入儲藥罐內(nèi)，通過連接霧化嘴、霧化器儲藥罐、吸入管與氧氣導(dǎo)管作為霧化管道，調(diào)節(jié)氧氣裝置直至儲藥罐有霧化液氣出現(xiàn)，用霧化液氣對創(chuàng)面進(jìn)行治療。換藥每天1次，共14天，各組治療完成后用無菌敷料包扎創(chuàng)面。
1.4.3 取材
對創(chuàng)面干預(yù)后第3、7、14天。每組5只大鼠，消毒，鋪巾，切除全層皮膚不傷及皮下脂肪及深筋膜，采取標(biāo)本后頸椎脫臼處死實驗動物。標(biāo)本一部分稱取重量，加入一定量的磷酸緩沖鹽溶液（PBS），備用。使用時，用勻漿器將標(biāo)本和PBS的混合物研磨充分。用離心機(jī)在轉(zhuǎn)速為2000～3000轉(zhuǎn)/分下保持20 min后移液槍收集上清液等待檢測各項指標(biāo)。標(biāo)本融化后仍然保持2～8℃的溫度，使用EGF、VEGF和TGF-β試劑盒進(jìn)行細(xì)胞因子水平檢測；另一部分放在10%福爾馬林溶液中固定24 h，然后脫鈣48 h備用，后期做石蠟切片。

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